在細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，很多研究者在使用血清時(shí)會(huì)糾結(jié)一個(gè)問(wèn)題：到底要不要熱滅活？

尤其是對(duì)于胎牛血清（FBS）——這被稱為“細(xì)胞的黃金營(yíng)養(yǎng)液”——有些實(shí)驗(yàn)室沿用舊習(xí)慣，習(xí)慣性地將其56℃熱處理30分鐘，以“滅活補(bǔ)體”。

但今天，我們想和大家從一個(gè)發(fā)育免疫學(xué)的角度，來(lái)講明白一個(gè)結(jié)論：

對(duì)于高品質(zhì)的胎牛血清，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)不再需要熱滅活處理！

01補(bǔ)體系統(tǒng)到底是什么？

補(bǔ)體系統(tǒng)是人體和動(dòng)物先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，由30多種血漿蛋白組成。這些蛋白在遇到細(xì)菌、病毒或異常細(xì)胞時(shí)，可以：

· 直接破壞細(xì)胞膜，誘導(dǎo)溶解；

· 吸引免疫細(xì)胞，放大炎癥反應(yīng)；

· 配合抗體清除抗原。

然而，補(bǔ)體的這種“攻擊力”，在細(xì)胞培養(yǎng)體系中往往是一個(gè)干擾因素，尤其是對(duì)于免疫細(xì)胞或干細(xì)胞，它們對(duì)補(bǔ)體非常敏感，輕則狀態(tài)不佳，重則直接死亡。

02胎牛體內(nèi)的補(bǔ)體發(fā)育情況

很多人不知道，胎牛（fetal bovine）并不是一個(gè)免疫成熟的個(gè)體。

從胚胎發(fā)育角度看：

換句話說(shuō)：胎牛血清中補(bǔ)體天然就少，且活性弱，不具備真正意義上的細(xì)胞殺傷力。

03熱滅活，反而可能適得其反？

傳統(tǒng)的熱滅活操作是在56°C水浴30分鐘，用來(lái)破壞補(bǔ)體蛋白。

但這個(gè)步驟也有副作用：

? 降解了有價(jià)值的生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子；

? 增加蛋白質(zhì)聚集，形成沉淀；

? 批次間差異增大，影響實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性；

? 縮短血清的有效期和活性窗口。

對(duì)于現(xiàn)代工藝制備的FBS產(chǎn)品，再做熱滅活反而是一種“過(guò)

04為什么以前的細(xì)胞培養(yǎng)要熱滅活血清？

2010年之前，國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)用的血清主要是新生牛血清，胎牛血清極少，隨著肉牛屠宰的規(guī)?；?，胎牛血清原料開(kāi)始出現(xiàn)，逐漸代替了新生牛血清。因此，在新生牛血清的時(shí)代，熱滅活有一定的意義，很多實(shí)驗(yàn)室也養(yǎng)成了習(xí)慣。

05哪些情況例外？仍可熱滅活！

雖然大部分情況不需要，但在以下特殊情境下，熱滅活仍然有意義：

● 做補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)（CDC）的對(duì)照組；

● 培養(yǎng)對(duì)補(bǔ)體極度敏感的原代細(xì)胞，如PBMC；

● 某些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，為排除補(bǔ)體變量；

● 已知某批次血清含有微量殘留補(bǔ)體活性（通過(guò)檢測(cè)或預(yù)試驗(yàn)判斷）。