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無外泌體血清滅活處理的步驟

發(fā)布日期:2024-05-20 14:56:30
 無外泌體血清不包含各種由蛋白質(zhì)編碼和調(diào)節(jié)的RNA,包括mRNA、miRNA、rRNA和snoRNA。它們中的大部分(>70%)仍然存在于通過長時(shí)間超速離心獲得的無囊泡FBS中,這些FBS常用于研究細(xì)胞外囊泡(EV)和細(xì)胞間通訊。FBS相關(guān)的RNA將與細(xì)胞外囊泡RNA(exrna)一起被分離,這將干擾下游的RNA分析。因此,在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過程中,有必要采取預(yù)防措施,減少FBS源RNA的干擾。
  
  1、內(nèi)毒素含量低,經(jīng)過三次納米過濾。
  
  2、嚴(yán)格控制批次差異。
  
  3、可靠和可追溯的來源。
  
  4、每個(gè)批次都應(yīng)提供相應(yīng)的檢驗(yàn)檢疫報(bào)告。
  
  5、適用于各種特殊的細(xì)胞培養(yǎng)。
  
  6、對于干冰運(yùn)輸,建議儲(chǔ)存溫度為-20℃至-10℃。
  

無外泌體血清


  無外泌體血清是指直徑為30-100納米的盤狀囊泡,其中含有多種蛋白質(zhì)、mRNA、非編碼RNA和其他分子。外泌體主要來自細(xì)胞內(nèi)的多囊體,多囊體的外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到細(xì)胞外基質(zhì)中。目前,大量文獻(xiàn)報(bào)道,幾乎所有類型的細(xì)胞都能產(chǎn)生和釋放外泌體。在不同的生物液體(血液、尿液、腦脊液、唾液、牛奶、腹水)中發(fā)現(xiàn)大量的外泌體。不含外泌體的血清被細(xì)胞分泌和釋放后,通過個(gè)別體液在體內(nèi)擴(kuò)散。被靶細(xì)胞攝取后,釋放內(nèi)部生物分子,參與細(xì)胞間交流,調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。血清的滅活處理步驟如下。
  
  1、選用與血清瓶規(guī)格相同的對照瓶。
  
  2、在對照瓶中放入與血清體積相等的水。
  
  3、溫度預(yù)檢。在對照瓶中插入2-3支選定的溫度計(jì)(以保證試驗(yàn)溫度的準(zhǔn)確性),放入水浴箱中,接通電源,調(diào)節(jié)溫控旋鈕,保持水浴箱中指示的溫度為56℃。
  
  4、將無外泌體血清滅活血瓶和帶溫度計(jì)的對照瓶放入水浴箱,待溫度計(jì)指示的溫度升至56℃時(shí),等待30分鐘。
  
  5、大瓶游離外分泌血清滅活后,重新進(jìn)行包裝。
  
  6、儲(chǔ)存:分包裝后,取無外分泌體血清樣品進(jìn)行無菌試驗(yàn),在-20~-70℃下儲(chǔ)存。


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